Práctica: Observaciones en fresco

Fundamento

  Las observaciones en fresco se utilizan para muestras demasiado espesas o sólidas, que necesitan ser diluidas para poder estudiar su morfología y movilidad. Para ello debemos partir de cultivos jóvenes o muestras recientes, al tener mayor número de microorganismos vivos.
  La movilidad se manifiesta por un desplazamiento de los microorganismos en todas las direcciones del campo de visión del microscopio, a diferencia del movimiento browniano de los gérmenes muertos, que no presentan movilidad y se desplazan todos ellos en la misma dirección por las corrientes de fluidos.


Material

- Portaobjetos (normales y excavados)
- Microscopio
- Triquinoscopio
- Lupa
- Mechero de alcohol
- Cubreobjetos
- Asa de siembra
- Agua destilada
- Muestras de Gymnorhynchus gigas (gusano en una seta) ,de las setas, y de agua estancada


Procedimiento

Ø Método de cámara húmeda:

Flameamos el asa de siembra con el mechero hasta que el alambre este incandescente.

Cogemos un vaso de precipitados con agua destilada, introducimos el asa de siembra y recogemos suero para pasarlo al portaobjetos. Repetiremos el proceso un par de veces, hasta tener una gota de suero considerable para poder hacer una extensión.

Flameamos de nuevo el asa de siembra redondeada con el mechero hasta que se ponga incandescente el alambre. Dejamos enfriar al aire o tocando otra zona de la muestra para que la alta temperatura no dañe el trozo que vamos a tocar.

Tocamos suavemente con el asa de siembra una zona de la muestra.

A continuación, ponemos en contacto el asa de siembra con la gota de suero fisiológico estéril que está en el portaobjetos y la extendemos por el porta mientras homogenizamos con el asa la muestra para realizar la suspensión.

En el caso de ser liquido ponemos directamente dos gotas de medio en el porta, ponemos un cubre y observamos.

Pondremos un cubre objetos sobre la muestra y observaremos al microscopio con objetivo de 40x o 60x dependiendo del microscopio.

Ø Gota pendiente.

Cogemos un cubreobjetos y con el asa de siembra redondeada cogeremos una gota de suspensión y la depositamos en el centro. (Realización de la suspensión igual que en el método de cámara húmeda)

Colocar sobre él un portaobjetos excavado invertido y untado con vaselina solida alrededor de la excavación para asegurarnos la unión entre ambos.

 Damos la vuelta, de forma que el cubreobjetos quede arriba y observaremos al microscopio con el objetivo 40x o 60x, dependiendo del microscopio.

Triquinoscopio y lupa

Observamos el agua, los gusanos y demás muestras sin ningún tratamiento previo. Con la lupa vemos las muestras con mayor aumento que a simple vista, y con el triquinoscopio aún más, aunque no tan ampliadas como en el microscopio óptico.