Práctica: Tinción simple

Fundamento

  Se basa en la afinidad del colorante por los diferentes componentes celulares. Estas tinciones se caracterizan por el empleo de un solo colorante.


Material

- Mechero de alcohol
- Asa de siembra redondeada
- Pinzas
- Puente de tinción
- Microscopio
- Portaobjetos y cubreobjetos
- Cristalizador
- Agua destilada
- Aceite de inmersión
- Pipeta Pasteur
- Colorante: azul de metileno al 1%


Procedimiento

Extensión: Se cogerá una muestra con asa de siembra o hisopo y se hará una suspensión sobre un portaobjetos que previamente tendrá una gota de agua destilada estéril  o suero fisiológico para poder realizar dicha suspensión.

Desecación y fijación: consiste en dejar secar la extensión y fijarla. Se realiza acercando y alejando el portaobjetos de la llama del mechero (con la ayuda de unas pinzas) hasta que la muestra quede seca.

Tinción: colocar el portaobjetos sobre el puente de tinción situado sobre el cristalizador (sobre el que previamente verteremos agua para diluir el tinte cuando lavemos la muestra). Después añadiremos el colorante,  cubriendo por completo la preparación y dejamos que actúe durante 1 min, tras el cual retiraremos el colorante de la extensión inclinando el portaobjetos y dejando que el tinte caída al cristalizador.

Lavado: Con ayuda de una pipeta Pasteur añadimos agua destilada sobre el portaobjetos hasta que el agua salga completamente limpia, dejando resbalar el agua sobrenadante.

Secar: dejamos secar la preparación al aire sobre papel absorbente.

Observación al microscopio: iniciaremos la observación desde los objetivos más bajos 5x, 10x, 40x ó 60x, y por ultimo observaremos a 100 x con aceite de inmersión y colocando un cubre objetos sobre el porta antes de incluir el aceite, para no estropear la muestra.

Práctica: Preparación de colorantes

Fundamento

  Se busca la realización de colorante azul de metileno al 1% para poder utilizarlo cuando sea necesario.


Material

- Embudo
- Pipeta automática
- Agua destilada
- Matraz aforado
- Azul de metileno comercial
- Pipeta Pasteur
- Parafilm


Cálculos

  Ya que partimos de azul de metileno comercial (supongamos 100%), y queremos preparar 50 ml de colorante al 1%:

     1____100
    x_____20

     x=0.2 ml de azul de metileno


Procedimiento

  Cogemos 0,2 ml de azul de metileno con la pipeta y los echamos a un matraz aforado de 50 ml. Luego con ayuda del embudo, echamos agua destilada, y enrasamos hasta el aforo con la pipeta Pasteur. Tapamos el matraz con parafilm y agitamos hasta homogeneizar.

Los líquenes

  Un liquen es el resultado de la simbiosis entre un hongo y un vegetal. Históricamente, los líquenes se habían situado en el reino Plantae, pero de unos años para acá, y dado sus características, muchos científicos los introducen en el reino Fungi.

  Los líquenes son seres pluricelulares que se caracterizan por su gran resistencia a condiciones adversas del medio, y por ello han colonizado gran cantidad de espacios con climas diferentes.

  También son buenos indicadores de contaminación: en los bosques donde haya líquenes significa que el aire esta limpio y exento de contaminación. Por ello no existen líquenes en los espacios cercanos a las ciudades.

Clasificación de las bacterias

  La clasificación de las bacterias según su morfología es una de las más útiles, ya que nos permite la diferenciación de las mismas a simple vista con el microscopio, y sin necesidad de hacer tinciones ni otros procedimientos.

  Así, diferenciamos las bacterias en tres grandes grupos: los cocos, de forma circular; los bacilos, de forma alargada; y los vibriones y espiroquetas, con formas más irregulares.

  Dentro de cada grupo, también se puede diferenciar el microorganismo por la forma en que se agrupa, es decir, la forma de sus colonias (los dibujos que se encuentran bajo los cocos y los bacilos).

Clasificación de los hongos

  Los hongos son uno de los cinco reinos de seres vivos. Aunque existen múltiples clasificaciones, la más utilizada es la siguiente:

  En primer lugar, se dividen en hongos superiores y hongos inferiores. Los primeros son los que no poseen células móviles, pues son los hongos terrestres más evolucionados. Los segundos son de tamaño microscópico y no llegan a fructificar en forma de seta.

  Los hongos superiores se dividen en ascomicetos (levaduras, trufas,..), que son los más numerosos; y basidiomicetos (champiñones, amanitas,...). Los ascomicetos se llaman así por sus esporas, las ascosporas. Los basiodiomicetos se reproducen por basidiosporas y son las setas clásicas y los hongos con sombrero.

  Los hongos inferiores, por su parte, se dividen en oomicófitos o mohos acuáticos, y zigomicófitos (mohos).

Práctica: Esporada

Fundamento

  El estudio de los hongos es muy importante en microbiología, ya que éstos producen multitud de alteraciones en los alimentos y de enfermedades en los seres humanos.
  Una de las técnicas de observación de hongos más utilizada es la esporada, en la que, como su propio nombre indica, se observa las esporas que desprenden las setas tras unas horas en reposo. Así, podremos observar las estructuras características de cada clase de hongo.
  En este caso, la observación la realizamos del hongo Agrocybe aegerita, comúnmente conocida como seta de chopo.

Material

- Ejemplar de Agrocybe aegerita
- Papel de filtro
- Tijeras
- Matraz Erlenmeyer
- Agua

Procedimiento

La toma de muestras de la esporada debe hacerse al lado de la llama del mechero de alcohol, flameando las asas de siembra antes y después de su uso.

Realizaremos la esporada de dos formas:
- La primera consiste en dejar la seta con el sombrero hacia abajo sobre un papel de filtro durante un día. De las esporas que caen sobre el papel, cogemos una muestra con un asa de siembra y la dejamos en un porta junto con una gota de aguan destilada. Le ponemos un cubre y observamos al microscopio.

- La segunda consiste en realizar un agujero en un papel de filtro e introducir la seta por el tallo. Después poner el papel de filtro sobre en matraz Erlenmeyer (con un poco de agua en su interior) con el sombrero por arriba y el tallo dentro del matraz. Al día siguiente recogimos muestra de esporas del papel de filtro y muestra de los gusanos que aparecieron en el tallo y dentro del matraz.

Práctica: Observaciones en fresco

Fundamento

  Las observaciones en fresco se utilizan para muestras demasiado espesas o sólidas, que necesitan ser diluidas para poder estudiar su morfología y movilidad. Para ello debemos partir de cultivos jóvenes o muestras recientes, al tener mayor número de microorganismos vivos.
  La movilidad se manifiesta por un desplazamiento de los microorganismos en todas las direcciones del campo de visión del microscopio, a diferencia del movimiento browniano de los gérmenes muertos, que no presentan movilidad y se desplazan todos ellos en la misma dirección por las corrientes de fluidos.


Material

- Portaobjetos (normales y excavados)
- Microscopio
- Triquinoscopio
- Lupa
- Mechero de alcohol
- Cubreobjetos
- Asa de siembra
- Agua destilada
- Muestras de Gymnorhynchus gigas (gusano en una seta) ,de las setas, y de agua estancada


Procedimiento

Ø Método de cámara húmeda:

Flameamos el asa de siembra con el mechero hasta que el alambre este incandescente.

Cogemos un vaso de precipitados con agua destilada, introducimos el asa de siembra y recogemos suero para pasarlo al portaobjetos. Repetiremos el proceso un par de veces, hasta tener una gota de suero considerable para poder hacer una extensión.

Flameamos de nuevo el asa de siembra redondeada con el mechero hasta que se ponga incandescente el alambre. Dejamos enfriar al aire o tocando otra zona de la muestra para que la alta temperatura no dañe el trozo que vamos a tocar.

Tocamos suavemente con el asa de siembra una zona de la muestra.

A continuación, ponemos en contacto el asa de siembra con la gota de suero fisiológico estéril que está en el portaobjetos y la extendemos por el porta mientras homogenizamos con el asa la muestra para realizar la suspensión.

En el caso de ser liquido ponemos directamente dos gotas de medio en el porta, ponemos un cubre y observamos.

Pondremos un cubre objetos sobre la muestra y observaremos al microscopio con objetivo de 40x o 60x dependiendo del microscopio.

Ø Gota pendiente.

Cogemos un cubreobjetos y con el asa de siembra redondeada cogeremos una gota de suspensión y la depositamos en el centro. (Realización de la suspensión igual que en el método de cámara húmeda)

Colocar sobre él un portaobjetos excavado invertido y untado con vaselina solida alrededor de la excavación para asegurarnos la unión entre ambos.

 Damos la vuelta, de forma que el cubreobjetos quede arriba y observaremos al microscopio con el objetivo 40x o 60x, dependiendo del microscopio.

Triquinoscopio y lupa

Observamos el agua, los gusanos y demás muestras sin ningún tratamiento previo. Con la lupa vemos las muestras con mayor aumento que a simple vista, y con el triquinoscopio aún más, aunque no tan ampliadas como en el microscopio óptico.