miércoles, 16 de noviembre de 2016

Práctica: Dilución seriada

Fundamento
  
  Las diluciones seriadas son bancos de diluciones en las que la sustancia a disolver se va trasvasando de tubo a tubo hasta conseguir la dilución deseada. Este procedimiento es útil en las pruebas de anticuerpos, de reconocimiento, y otras muchas pruebas microbiológicas.

Material

- Matraz aforado de 100 ml
- 4 tubos de ensayo
- Micropipeta con varias boquillas
- Agitador
- Agua destilada
- Azul de metileno
- Gradilla
- Pipeta de 5 ml



Cálculos

Primeramente se hace un esquema del banco de diluciones seriadas:




  A continuación, mediante la fórmula del factor de dilución hallamos la concentración final de cada tubo, y mediante la fórmula de diluciones seriadas hallamos el volumen que hay que trasvasar de tubo a tubo, y el volumen que hay que desechar del último (la misma cifra)



Procedimiento

- En una gradilla se colocan los cuatro tubos de ensayo.


- Se echan con una pipeta 5 ml de agua destilada en cada tubo.
- Con la micropipeta se trasvasan 0,55 ml de la disolución madre al tubo 1 (se debe cambiar la punta de la pipeta al trasvasar a cada tubo). Después se homogeneiza el tubo con el agitador.


- Se repite el paso anterior, trasvasando 0,55 ml de un tubo al siguiente.
- Se desechan 0,55 ml del último tubo para que su volumen final sea de 5 ml.


Resultado

  Se consiguen 4 tubos de dilución seriada con razón 1/10 y volumen de 5 ml







El autoclave

  El autoclave es un aparato muy importante en el laboratorio de microbiología, ya que nos permite esterilizar instrumental y sustancias utilizando para ello el vapor de agua a presión.



    Se trata de un instrumento pesado y consistente, ya que debe aguantar las altas presiones que necesitan sus procesos de esterilización. También existen tipos de autoclave que funcionan con óxido de etileno en lugar de vapor de agua.
  El proceso dura normalmente unos 15-20 min. Consiste en introducir el material, teniendo cuidado de no cerrarlo completamente por las altas presiones, y cerrar la tapa hermética para que se ponga en marcha.
  También es conveniente introducir un indicador de esterilización (comúnmente en forma de papel) para cerciorarse de que el proceso se ha realizado satisfactoriamente.